尊龙凯时提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书涵盖了细胞培养的各个方面，确保您能够顺利进行实验操作。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁与悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K培养基 + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议按1:2比例传代，传代后每两天更换培养液。

二、细胞处理

收到细胞后，请将其培养至良好状态，随后加入完全培养液并封好。使用75%酒精为细胞瓶外壁消毒后，置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存，不同倍数下的图像需保存为重要售后依据。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管，保留5ml培养基继续孵育。若汇合度超过80%，进行以下操作：
1）贴壁细胞的传代：弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗。加入0.25%胰蛋白酶消化约1-2ml，观察细胞状态。待细胞脱落后加入5ml培养基终止消化。轻轻吹打使细胞脱落后，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，去除上清，重悬于1-2ml培养基。按1:2比例分瓶，补充新的培养基至5-8ml，然后放入培养箱中。
2）悬浮细胞的传代：可选择方法一，离心收集细胞后补加培养液；或选择方法二，进行半数换液，最终按1:2比例分瓶。

b. 细胞冻存

当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS冲洗。加入0.25%胰蛋白酶消化液1ml，观察细胞回缩后加入5ml培养基终止消化。转移至15ml离心管，离心后去除上清，加入1ml无血清冻存液，混匀后放入冻存管，最后将其置于-80℃冰箱中。

c. 细胞复苏

从液氮取出冻存管后快速解冻于37℃水浴中，随后用75%酒精消毒冻存管外表。将细胞转移至含5ml培养基的15ml离心管中，离心后弃上清，重悬于5ml培养基，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱中，第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落。若脱落较多，将培养液收集并离心后进行重悬处理，确保细胞状态良好。

五、售后条款

若细胞在运输过程中出现问题，例如丢失或污染，需在规定时间内提供真实实验数据以便于核实。如细胞因客户操作不当或不当处理造成问题，则不予重发。

尊龙凯时致力于为您提供高质量的细胞培养服务，确保您的实验步骤严谨可靠。