人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% P

传代方法：首次建议1:2传代。传代情况可于2天后换液。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞恢复良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是保证运输细胞质量的最佳方法。收到细胞时，使用75%酒精对细胞瓶进行喷洒消毒，之后将其放置于超净台严格执行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后方可进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好包含40x、100x和200x）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

若细胞未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留下5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，随后用显微镜观察细胞消化情况，若细胞大多数变圆并脱落，迅速将其拿回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打使细胞脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001）混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃中存放超过24小时后再转入液氮罐。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶中，于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞的贴壁能力较弱，运输过程中可能会出现细胞脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，建议将所有培养液收集至离心管，进行1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀后可加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，补充1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

若细胞出现问题，重发的情况包括：运输过程中的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；细胞污染；常温运输后细胞未存活等。重发标准需提供实验结果；若因客户操作不当或非推荐培养体系导致的细胞问题，则不予以重发。请在收到细胞后及时拍照并反馈，维权时需提供相关证据，确保服务的诚信与质量。

欢迎您选择尊龙凯时的细胞产品，我们承诺为您提供优质的售后服务和保障。