尊龙凯时提供的SV40转染人成骨细胞HFOB119的培养说明书如下。在进行细胞培养之前，请务必遵循以下指南，以确保细胞的健康成长和实验的顺利进行。

一、细胞培养条件

- **细胞名称**: SV40转染人成骨细胞HFOB119
- **生长特性**: 贴壁生长
- **冻存条件**: 使用无血清冻存液（货号：C7001）
- **培养体系**: DMEM/F12 + 0.3mg/ml G418 + 10% FBS
- **传代方法**: 初次建议进行1:2传代，传代间隔为2天换液。
- **备注**: 请使用无菌离心管收集培养基以便进行对比培养。如对比结果不佳，建议直接购买我们推荐的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，应立即进行处理。培养至良好状态后，满液后封口是运输细胞的最佳方法。首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入设置为 35℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数进行拍照（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片至关重要，未提供照片将默认收到状态良好。在传代后，建议一瓶使用原瓶完全培养基，另一瓶使用自制完全培养基，以便进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

1. 如果细胞未达到80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基置于35℃、5% CO2孵箱中培养；
2. 若细胞密度超过80%，进行传代，具体步骤如下：
    1）弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗1-2次。
    2）加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放于35℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞如大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后加入5ml完全培养基终止消化。
    3）轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
    4）依照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），添加新完全培养基至5-8ml/瓶，置于35℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待其变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮，需在-80℃存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于35℃水浴中解冻至无结晶，外壁用75%酒精擦拭；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种于T25培养瓶，放于35℃、5% CO2培养箱中继续培养；
4. 第二天更换新鲜完全培养基。

四、注意事项

细胞可能在运输过程中因不牢固而发生脱落，这属于正常现象。如发现细胞脱落较多，可按以下方法处理：将所有培养液收集至离心管，进行1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。添加1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打并消化1-2分钟后，用5ml完全培养基终止反应，随后进行离心，重悬于1-2ml完全培养基。再依照1:2比例进行分瓶传代，添加新完全培养基至5-8ml/瓶并放入35℃、5% CO2细胞培养箱中。

五、售后条款

1）细胞问题重发条件：
- 运输过程中因各种问题导致的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发。
- 对细胞污染问题，请在收到48小时内反馈真实实验结果，核实后重发。
- 常温发货细胞，若静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），均可重发。
- 收到细胞当天及第2、3天请务必拍照，3天内未反馈视为产品合格。
- 4-7天内如出现问题，需提供收到细胞前三天的照片、问题时的照片及详细操作步骤，与技术人员沟通后由其判断责任并处理。
2）不予重发情况：
- 客户自身造成的污染、操作不当、使用非推荐培养体系等，均不予重发。
- 若收到后2天内未反馈，也不进行重发处理。
- 具体情况视实际情况而定。

在细胞培养的一步一步中，尊龙凯时一直陪伴您，为您的科研工作提供最可靠的支持！