尊龙凯时提供的SV40转染人成骨细胞HFOB119培养说明书涵盖了细胞的培养条件、处理步骤及注意事项，旨在帮助科研人员顺利进行细胞实验。

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系： DMEM/F12 + 0.3mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：首次建议按1:2比例进行传代，通常每两天更换培养液。
备注：使用无菌离心管收集培养基以便于对比实验；如对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

在收到细胞后，建议在良好状态下灌满完全培养液并封好瓶口，这是保持细胞活力的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内严格执行无菌操作。将细胞瓶放入33℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要依据，若未提供，则视为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞的汇合度未超过80%，需将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入33℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于33℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 当细胞大部分变圆并脱落后，迅速加5ml完全培养基以终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟。
5. 弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶后，放入33℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml强生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，请先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速置入33℃水浴中解冻，直到无可见结晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，放入33℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，少数细胞可能出现脱落现象，如发生较多脱落，可采取以下方法处理：收集所有培养液于离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清并进行过渡培养，随后可进行消化处理。确保细胞状态良好再进行分瓶传代。

五、售后条款

关于细胞出现问题的重发政策，包括但不限于运输过程中问题、细胞污染、活性检测及照片提供等，请用户在收到产品时及时与我们联系，以便确认是否符合重发条件。同时，对于因用户操作不当或不符合推荐培养条件而导致的问题，我们将不予重发。

我们期待与您在细胞研究和应用中的深度合作，尊龙凯时将始终为您提供优质的产品和服务。