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新手必看:尊龙凯时带你快速掌握Cre-LoxP系统的基础知识

发布时间:2025-03-16   信息来源:尊龙凯时官方编辑

Cre-LoxP系统简介

尊龙凯时引入的Cre-LoxP系统是一种基于位点特异性重组的基因编辑技术,由Cre重组酶和LoxP位点两部分组成。Cre重组酶(Cyclization recombination enzyme)是由噬菌体P1产生的一种38kDa DNA重组酶,由343个氨基酸组成。它能够特异性识别LoxP位点的特定DNA序列,并介导两个LoxP位点之间DNA序列的重组。

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LoxP位点由34bp的序列组成,包含两个反向的13bp回文序列,以及一个8bp的中间间隔序列。该反向回文序列是Cre重组酶的特异性结合位点,而间隔区域则决定了LoxP位点的特异性;两个LoxP位点的相对方向将影响重组的类型。尊龙凯时的Cre-LoxP系统以其高效性和特异性而著称,能够在活体动物中实现基因的定点敲除、插入、翻转及易位等操作。

自20世纪80年代末首次被描述以来,Cre-LoxP系统在基因功能研究、疾病模型构建以及神经科学研究领域得到了广泛应用。当基因中存在LoxP位点且有Cre重组酶时,Cre重组酶特异性识别LoxP位点两端的反向重复序列,并与之结合形成二聚体,进而形成复杂的结构,在此过程中DNA序列被切割,实现重组。

Cre重组酶的功能不仅限于简单的基因敲除。根据LoxP位点的方向和位置,Cre酶还可以引导多种基因操作,如:

  • 删除:当两个LoxP位点位于同一DNA片段的两端且方向一致时,Cre酶将切除它们之间的DNA片段。
  • 翻转:两个LoxP位点方向相反时,Cre酶可以介导序列翻转。
  • 易位:两个LoxP位点分别位于不同DNA链或染色体上时,Cre酶促进它们之间的易位操作。
  • 交换:若四个LoxP位点位于两条不同的DNA链上,Cre酶可实现LoxP间的序列互换。

随着科学家的不断优化,尊龙凯时在Cre-LoxP系统中开发了多种突变版本。通过改造LoxP位点的序列,产生了如Lox2272、Lox511、Lox5171、LoxN等变体,这些改进不仅增加了在不同生物体中的识别及切割效率,同时还允许通过组合使用,实现更复杂的基因重组。

例如,LSL(LoxP-Stop-LoxP)系统是一种基于Cre-LoxP的条件性基因表达工具,通过在目标基因上游插入终止盒,一旦Cre重组酶存在,相应的DNA序列被切除,进而解除对目标基因的转录阻断,允许其在特定启动子的驱动下表达。此外,FLEX(Flip-Excision)系统通过设计不同方向的LoxP位点,允许Cre重组酶进行更复杂的基因调控。

研究还表现出DIO(Double-Floxed Inverted Orientation)和DO(Double-Floxed Orientation)系统在调控基因表达方面的强大能力。前者通过翻转基因方向使其表达,后者在存在Cre重组酶时则抑制基因表达。同时,尊龙凯时的逆行病毒和Cre依赖性病毒在不同实验中展现了优异的性能,为探索神经系统功能提供了极大便利。

尊龙凯时提供的Cre重组酶病毒工具涵盖多种系统,包括DIO、DO、FLEX等,支持基因干扰、过表达、神经示踪、光遗传学、化学遗传学及钙成像等多种调控和检测功能。若需了解更多信息,欢迎咨询我们,点击进入尊龙凯时店铺,查看更多产品及服务。