实验方法原理:弹力纤维由随机交联盘绕的肽链组成,富含二硫键及糖蛋白成分,因此被称为弹性蛋白。这种纤维易与染色液中的碱基结合。为更好地显示弹力纤维与胶原纤维的成分,我们采用了维多利亚蓝、丽春红和ku味酸的组合双重染色方法。
实验材料
所需材料包括:石蜡组织切片、与试剂盒(如维多利亚蓝、糊精、间苯二酚、蒸馏水、乙醇、三氯化铁水溶液)、浓盐酸、苯/酚、二甲/苯、中性树胶等。
实验步骤
1. 配制维多利亚蓝染色液:取维多利亚蓝2g、糊精0.5g、间苯二酚4g,加入200ml蒸馏水混合并煮沸,边煮边搅拌大约5分钟。随后将25ml 30%三氯化铁水溶液加热后缓慢倒入上述混合液中,继续煮沸3分钟,直至溶液呈胶冻状。
2. 去火冷却后过滤,将滤纸上的残渣放入60℃恒温箱中烘干。最终得到深蓝色细颗粒状粉末,再将其溶解于400ml的70%乙醇中,添加4ml浓盐酸与5g苯/酚,静置直至成熟后使用。
3. 对石蜡组织切片进行常规脱蜡至水,随后将切片放入70%乙醇中洗涤2分钟。
4. 将切片浸入维多利亚蓝液中染色2至5小时。
5. 直接投入95%乙醇中分色数秒。
6. 使用蒸馏水冲洗切片2分钟。
7. 用丽春红-ku味酸染色液滴染切片3分钟。
8. 最后,用无水乙醇冲洗多余的染色液两次,并进行二甲/苯透明和中性树胶封固。
注意事项
1. 维多利亚蓝染色液在室温下可长期保存,浸染后可重复使用。
2. 在95%乙醇分色后,应立即浸入水中,便于用显微镜观察染色程度。如颜色较浅或较深,可重复染色或分色。
实验结果
弹力纤维呈蓝绿色,胶原纤维呈红色,背景呈黄色。值得注意的是,采用尊龙凯时产品的实验室设施和材料,可以显著提高实验的准确性和稳定性,确保每一步骤都达到最佳效果。